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一、试验原理

      细胞划痕法是简捷测定细胞迁徙运动和修复能力的要领，类似体外伤口愈合模子，在体外作育皿或平板作育的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的*区域划线，去除*部分细胞，然后继续作育细胞至试验设准时间，视察周边细胞是否迁徙至*划痕区，以此判断细胞的生长迁徙能力
。试验通常需设定比照组和供试品组，通过差别分组之间的细胞关于划痕区修复能力的差别可以判断供试品迁徙与修复能力
。

二、适用工具

      包括加了某种处置惩罚因素、药物、重组卵白、外源性基因、生长因子等供试品
。

三、试验办法

1）所有使用的用具均需要灭菌，包括直尺和marker笔在使用前需要放在清洁台内用紫外灯照射30min以上；

2）用marker笔比着直尺在6孔板背后每孔横向和纵向各三等份划线做记号，凭证5×105cell/孔接种细胞，详细数目可凭证细胞差别而调解，目的以住宿能抵达95%以上汇合率为宜；

3）细胞作育24h后用10μL枪头比着直尺瞄准孔板，轻推横向、纵向划线形成划痕，用PBS漂洗细胞3次，去除划掉的细胞；

4）在比照组和供试品组孔中加入无血清作育基配制的供试品和比照样品，空缺比照组只加入无血清作育基；

5）转移至37℃、5%CO2作育箱中，于0h、24h时，以横向和纵向的交点为焦点，在显微镜下照相；

注1：在用PBS缓冲液冲洗时，注重贴壁逐步加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响试验照相效果
。

注2：一样平常做划痕试验，都是无血清或者低血清(<2%），不然细胞增殖就不可忽略
。

注3：差别孔之间较好用统一个枪头
。

四、数据统计

      丈量划痕区面积，通过牢靠划痕区移行细胞的总面积除以牢靠划痕区初始面积，盘算每组细胞迁徙率
。

试验示例

1.试验质料

3. 试验效果

比照组-0h	比照组-24h
比照组-48h	比照组-72h
试验组-0h	试验组-24h
试验组-48h	试验组-72h

注：若是长时间视察时，需思量到划痕缩小是细胞迁徙和细胞滋生配相助用的效果，而不是纯粹的细胞迁徙，若是要纯粹的思量细胞迁徙，先用丝裂霉素（1 μg/mL）处置惩罚一小时，抑制细胞的破碎
。另外，使用无血清作育基也可以降低细胞增殖对实验效果的影响，但同时由于细胞内信号传导系统整体性的下调理，细胞迁徙的速率也会有所改变
。